尿素在脲酶的作用下，水解生成氨和二氧化碳。氨在α-酮戊二酸和还原型辅酶Ⅰ存在下，经谷氨酸脱羟酶（GLDH）催化生成谷氨酸。同时，还原型辅酶Ⅰ被氧化成氧化型辅酶Ⅰ。还原型辅酶Ⅰ在340nm波长处有吸收峰，其吸光度下降的速率与待测样品中尿素含量成正比。
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